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⇒ HLA-SuBiTo
基于测序的高分辨技术
 所有HLA-SuBiTo试剂盒采用简单统一的配制：
⇒ 为分辨杂合子基因组合，减少不确定性，在第一步采用两套扩增同时进行。
⇒ 凝胶电泳
⇒ 采用ExoSAP-ITTM纯化PCR产物
⇒ HLA Class I位置用6套序列扩增
⇒ HLA Class II位置用2-3套序列扩增
⇒ PCR阳性扩增时上游和下游引物对同时进行扩增反应。
⇒ IT-Prec-Buffer沉淀
⇒ 加样到毛细管测序仪
⇒ 用HLA-HiType软件分析
Class I 分析策略：
两组特异扩增策略是高分辨和高通亮的理想设计组合。
6套扩增反应对应2，3，和4外显子。阳性PCR扩增时，上游和下游引物扩增反应同时发生。
此外，外显子5-8作为内参照使序列分析覆盖整个HLA基因编码区。
Class II分析策略：
两对引物扩增DRB区域的外显子2和三对引物扩增 DQB区域的外显子2和3。
PCR阳性扩增时上游和下游引物对同时进行扩增反应。
HLA SuBiTo DRB1试剂盒包含进一步分析的二级引物混合物，以解决在密码子86位置的不确定杂合子。
⇒试剂盒组份：
扩增过程需要的所有试剂,包括IT-Taq酶
EXO-SAP-ITTM 用于PCR产物纯化
基因座和外显子特异序列混合液,包含BigDye®
Prec Buffer用于产物的沉淀
对于一般不确定的结果,进一步补充测序的试剂直接包含在试剂盒中
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编号 |
名称 |
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002 090 025 |
HLA-SuBiTo A high res |
扩增靶片断位于外显子1-4，内标扩增外显子5-8。因此得到几乎完整的全部HLA基因编码区序列。 |
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002 091 025 |
HLA-SuBiTo B high res |
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002 092 025 |
HLA-SuBiTo C high res |
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002 093 025 |
HLA-SuBiTo DRB1 high res |
扩增外显子2 |
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002 094 025 |
HLA-SuBiTo DQB1 high res |
扩增外显子3 |
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